《宝莲灯》中饰演的太上老君六岁的时候,父母便把他送到上海法藏寺拜兴慈法师为师,法号乘培。1939年起,游本昌先后在上海,南京等地的小学读书,南京市考棚小学毕业后,曾就读于南京育群中学,商业职业学校,上海立信会计学校。1951年高中毕业,由南京市文联推荐加入南京文工团。1952年,随团调任上海华东人民艺术剧院演员。同年,入上海戏剧学院表演系学习。1956年毕业后,分配到中央实验话剧院任演员。1980年,加入中国戏剧家协会。1994年创办北京本昌艺术传播中心。1977年,出演话剧《枫叶红了的时候》,在剧中饰演陆峥嵘。1979年,出演话剧《大风歌》,在剧中饰演吕产。1981年,出演电视剧《孔乙己》,在剧中饰演描写鲁迅人物孔乙己。1984年,与虞梦出演童话电影《“下次开船”港游记》,该片根据严文井的同名小说改编；同年,参加1984年中央电视台春节联欢晚会并表演哑剧小品《淋浴》。1985年,主演由张戈执导的神话喜剧《济公》,在该剧中饰演助人为乐,劫富济贫的济公,其凭借该剧获得第4届中国电视金鹰奖最佳男主角。1987年,参加央视春晚并表演戏剧小品《孙二娘开店》。1988年,与王鹰共同主演剧情电影《姑苏一怪》；同年,参加1988年中央电视台春节联欢晚会并表演小品《急诊》。1989年,搭档黄宗洛,臧金生主演的神话喜剧《济公活佛》播出,在剧中饰演劫富济贫的济公。1995年,主演由刘国权执导的剧情电影《冒牌皇帝》上映。1998年,与张寄蝶,石仁全主演的电视剧《济公游记》播出,在剧中饰演活佛济公；同年,参加央视元旦晚会并表演小品《济公办学》。游本昌活动照片2000年,自导自演百集哑剧系列剧《游先生哑然一笑》。2003年,主演由洪丹强执导的古装电视剧《清明酒家》,在剧中饰演河镇衙门的苏师爷。2004年,与邬倩倩共同主演神话爱情电视剧《九尾狐与仙鹤》,在剧中饰演神仙太白金星,该剧改编于中国流传的故事《孟姜女哭长城》,讲述了孟姜女和万喜良的故事。2005年10月4日,和曹骏,焦恩俊出演的古装神话电视剧《宝莲灯》在中央电视台电视剧频道首播,在剧中饰演神仙太上老君。2009年4月7日,自导自演的神话电视剧《了凡》播出。2010年,与王紫伊主演的悬疑电影《古刹风云》上映,该片根据南宋初期一个公案—真假柔福公主案改编而成；随后,和薛之谦出演励志电影《一只狗的大学时光》,在片中饰演三轮车大爷；同年,与杨紫琼出演古装武侠电影《剑雨》。2011年3月17日,主演由乌尔善执导的动作片《刀见笑》上映；10月5日,搭档房祖名出演的爱情片《李献计历险记》上映。2012年6月28日,和周迅,陈坤出演的爱情片《画皮Ⅱ》在中国内地公映；同年,主演由袁子勇,吴群执导的纪录片《北京记忆》。2013年6月11日,搭档吴孟达出演的喜剧情感电影《大片》上映；8月30日,和郭涛出演的青春爱情片《致命闪玩》上映；9月28日,与张智霖出演的爱情片《白狐》上映。2021年8月13日,和马丽,文章主演的喜剧电影《测谎人》在全国公映,在片中饰演普渡大师；12月,获得中国国家话剧院“终身荣耀艺术家”称号。2022年11月4日,特别出演的医疗情感关怀剧《谢谢你医生》播出；12月26日,出演的古装武侠剧《少年歌行》在优酷播出。2023年3月10日,主演的电视剧《了不起的我们》在温江开机；3月27日,官宣加盟《2023电视剧品质盛典》。
家庭背景游本昌的女儿是游思涵。剃度出家2009年7月28日下午3点30分,游本昌在黑龙江省牡丹江市绥芬河市大光明寺剃度出家；7月29日上午9点,他正式由畅怀法师受出家沙弥戒,并赐法名定畅。
游本昌是一直以来被大众所熟知的演员,他扮演的济公形象深入人心,始终坚持自己的艺术操守和匠人精神。作为一名表演艺术者,由他塑造的“济公”这样一个的角色教化了人们,它的分量在社会中理应得到升华。所以,游本昌所阐释的济公二字不仅是一个打抱不平,乐善好施的艺术形象,他更把这二字解释为“济世为公”,“公”就是公众,是大公无私的精神。游本昌饰演的济公是一代人的青春记忆,在电视剧《济公》中,只要“鞋儿破,帽儿破,哪里有不平哪有我”的歌声响起,那个身穿破僧袍,手摇破蒲扇,看似疯疯癫癫,实则身怀绝技的济公形象,便会立刻浮现在很多人的脑海中。